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产品简介
GV3101 菌株为 C58 型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因 rif,基因型为:C58 (rifR) TipMP90 (pTiC58DT-DNA) (gentR) Nopaline,太阳集团tyc9728开发的 GV3101 电转感受态特别适用于大质粒的转化:经 pCAMBIA2301 质粒检测转化效率>105 cfu/μg DNA;经 pCAMBIA2301-ZH 质粒 (40 kb) 检测转化效率可达 5 × 103 cfu/μg DNA。为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型 Ti 质粒 pMP90,pMP90 型 Ti 质粒含有筛选标签:gent,赋予 GV3101 菌株庆大霉素抗性,适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作,此质粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因组必需的元件,pMP90 质粒自身的 T-DNA 转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体 T-DNA 顺利转移)。
产品组成
组分
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CC701 (10 支)
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CC701 (20 支)
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GV3101 Electroporation-Competent Cell
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10 × 100 μl
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20 × 100 μl
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储存条件
本产品应置于-80℃储存,勿置于-20℃或液氮中保存
注意事项
❖ 加入质粒时体积不应大于感受态体积的 1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。
❖ 混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
❖ 平板上阳性克隆密度过大时,由于营养不足,阳性克隆生长变慢,菌落变小,为了获得大的菌落,应减少质粒用量。
❖ 利福平浓度不应高于 25 μg/ml,过高的利福平浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。本公司 GV3101 感受态计算转化效率时所用平板只含有 50 μg/ml Kan,若所用平板含有 20 μg/ml Rif 则转化效率降低到 1/2。
❖ 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止 Ti 质粒丢失,但链霉素不利于农杆菌的转基因操作,所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素,Ti 质粒丢失的概率极低 (可以忽略)。
关键词:
【CC701】GV3101感受态细胞
农杆菌GV3101
感受态细胞
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